Prodotti
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR Kit ta 'skoperta għal 2019-nCoV
Użu mistenni
Dan il-kit jintuża għall-iskoperta kwalitattiva ta 'koronavirus ġdid (2019-nCoV) bl-użu ta' tampuni tal-griżmejn, tampuni nasofarinġi, fluwidu tal-ħasil bronkoalveolari, sputum. Ir-riżultat ta 'sejbien ta' dan il-prodott huwa biss għal referenza klinika, u m'għandux jintuża bħala l-uniku evidenza għal dijanjosi klinika u trattament.Analiżi komprensiva tal-kundizzjoni hija rakkomandata flimkien mal-manifestazzjonijiet kliniċi tal-pazjent u testijiet oħra tal-laboratorju.
Prinċipju ta' spezzjoni
Il-kit huwa bbażat fuq teknoloġija RT-PCR f'pass wieħed.Fil-fatt, il-ġeni ORF1ab u N tal-koronavirus il-ġdid tal-2019 (2019-nCoV) intgħażlu bħala r-reġjuni fil-mira tal-amplifikazzjoni.Primers speċifiċi u sondi fluworexxenti (is-sondi tal-ġeni N huma ttikkettjati b'FAM u s-sondi ORF1ab huma ttikkettjati b'HEX) huma ddisinjati biex jikxfu RNA tal-koronavirus tat-tip ġdid 2019 f'kampjuni.Il-kit jinkludi wkoll sistema ta 'skoperta ta' kontroll intern endoġenu (sonda tal-ġene ta 'kontroll intern ittikkettata b'CY5) biex timmonitorja l-proċess ta' ġbir ta 'kampjuni, amplifikazzjoni ta' RNA u PCR, u b'hekk tnaqqas ir-riżultati negattivi foloz.
Komponenti ewlenin
| Komponenti | Volum（48T/Kit） |
| Soluzzjoni ta' reazzjoni RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) | 864µl |
| Kontroll negattiv | 1500µl |
| Kontroll pożittiv nCOV (l ORF1ab N Gene) | 1500µl |
Reaġenti proprji: reaġenti tal-estrazzjoni jew tal-purifikazzjoni tal-RNA.Kontroll negattiv/pożittiv: Il-kontroll pożittiv huwa RNA li fih il-framment fil-mira, filwaqt li l-kontroll negattiv huwa ilma ħieles mill-aċidu nuklejku.Waqt l-użu, għandhom jipparteċipaw fl-estrazzjoni u għandhom jitqiesu bħala infettivi.Għandhom jiġu mmaniġġjati u mormija skont ir-regolamenti rilevanti.
Il-ġene ta' referenza interna huwa l-ġene RnaseP uman.
Kundizzjonijiet tal-ħażna u data ta 'skadenza
-20±5 ℃, evita l-iffriżar u t-tidwib ripetuti aktar minn 5 darbiet, validu għal 6 xhur.
Strument applikabbli
B'FAM / HEX / CY5 u strument ieħor tal-PCR fluworexxenti b'ħafna kanali.
Rekwiżiti tal-kampjun
1.Tipi ta 'kampjuni applikabbli: tampuni tal-griżmejn, tampuni nażofarinġi, fluwidu tal-ħasil tal-bronkoalveolari, sputum.
2. Ġbir tal-kampjuni (teknika asettika)
Tampuni tal-farinġi: Imsaħ it-tunsilli u l-ħajt tal-farinġ ta’ wara b’żewġ tampuni fl-istess ħin, imbagħad għaddas ir-ras tat-tampuni f’tubu tat-test li jkun fih is-soluzzjoni tal-kampjunar
Sputum: Wara li l-pazjent ikollu sogħla profonda, iġbor l-isputum mis-sogħla f'tubu tat-test b'għatu bil-kamin li jkun fih is-soluzzjoni tat-teħid tal-kampjuni;Fluwidu tal-ħasil tal-bronkoalveolari: Teħid ta 'kampjuni minn professjonisti mediċi.3.Ħażna u trasport ta 'kampjuni
Il-kampjuni għall-iżolament tal-virus u l-ittestjar tal-RNA għandhom jiġu ttestjati kemm jista 'jkun malajr.Kampjuni li jistgħu jiġu skoperti fi żmien 24 siegħa jistgħu jinħażnu f'4℃;dawk li ma jistgħux jiġu skoperti fi żmien 24
sigħat għandhom jinħażnu f'-70℃ jew inqas (jekk ma jkunx hemm kundizzjoni ta' ħażna ta' -70℃, għandhom ikunu
maħżun temporanjament fi -20 ℃ friġġ).Il-kampjuni għandhom jevitaw l-iffriżar u t-tidwib ripetuti waqt it-trasport.Il-kampjuni għandhom jintbagħtu lil-laboratorju kemm jista' jkun malajr wara l-ġbir.Jekk il-kampjuni jeħtieġ li jiġu ttrasportati fuq distanzi twal, il-ħażna tas-silġ niexef hija rakkomandata.
Metodi tat-Test
1 Ipproċessar tal-kampjun u estrazzjoni tal-RNA (żona tal-ipproċessar tal-kampjun)
Huwa rakkomandat li tieħu 200μl ta 'kampjun likwidu għall-estrazzjoni RNA.Għal passi ta 'estrazzjoni relatati, irreferi għall-istruzzjonijiet ta' kits ta 'estrazzjoni ta' RNA kummerċjali.Kemm in-negattiv kif ukoll negattiv
kontrolli f'dan il-kit kienu involuti fl-estrazzjoni.
2 Preparazzjoni tar-reaġent tal-PCR (żona tal-preparazzjoni tar-reaġent)
2.1 Neħħi l-komponenti kollha mill-kit u ħoll u ħallat f'temperatura tal-kamra.Iċċentrifuga fi 8,000 rpm għal ftit sekondi qabel l-użu;ikkalkula l-ammont meħtieġ ta 'reaġenti, u s-sistema ta' reazzjoni hija ppreparata kif muri fit-tabella li ġejja:
| Komponenti | N serving (sistema 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Soluzzjoni ta' reazzjoni RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = numru ta’ kampjuni ttestjati + 1 (kontroll negattiv) + 1 (nCOVkontroll pożittiv) | |
2.2 Wara li tħallat sewwa l-komponenti, ċentrifuga għal żmien qasir biex tħalli l-likwidu kollu fuq il-ħajt tat-tubu jaqa 'fil-qiegħ tat-tubu, u mbagħad alikwot is-sistema ta' amplifikazzjoni ta '20 µl fit-tubu PCR.
3 Teħid ta' kampjuni (żona ta' preparazzjoni tal-kampjun)
Żid 5μl tal-kontrolli negattivi u pożittivi wara l-estrazzjoni.L-RNA tal-kampjun li jrid jiġi ttestjat jiġi miżjud mat-tubu tar-reazzjoni tal-PCR.
Għatti t-tubu sewwa u ċentrifuga fi 8,000 rpm għal ftit sekondi qabel ittrasferih fiż-żona ta 'skoperta ta' amplifikazzjoni.
4 Amplifikazzjoni tal-PCR (żona ta' skoperta amplifikata)
4.1 Poġġi t-tubu tar-reazzjoni fiċ-ċellula tal-kampjun tal-istrument, u ssettja l-parametri kif ġej:
| stadju | Ċiklu numru | Temperatura(°C) | Ħin | ġbirsit |
| Reversetraskrizzjoni | 1 | 42 | 10min | - |
| Pre-denaturation | 1 | 95 | 1min | - |
| Ċiklu | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | ġbir tad-data |
Għażla tal-kanal tas-sejbien tal-istrumenti: Agħżel il-kanal FAM、HEX、CY5 għas-sinjal tal-fluworexxenza.Għal referenza fluworexxenti XEJN, jekk jogħġbok ma tagħżelx ROX.
5 Analiżi tar-riżultat (Jekk jogħġbok irreferi għall-istruzzjonijiet sperimentali ta 'kull strument għall-issettjar)
Wara r-reazzjoni, issalva r-riżultati.Wara l-analiżi, aġġusta l-valur tal-bidu, il-valur tat-tmiem, u l-valur tal-limitu tal-linja bażi skont l-immaġni (l-utent jista 'jaġġusta skont is-sitwazzjoni attwali, il-valur tal-bidu jista' jiġi ssettjat għal 3 ~ 15, il-valur tat-tmiem jista 'jiġi ssettjat għal 5 ~ 20, aġġustament) fil-graff logaritmiku Fil-limitu tat-tieqa, il-linja tal-limitu hija fil-fażi logaritmika, u l-kurva ta 'amplifikazzjoni tal-kontroll negattiv hija linja dritta jew taħt il-linja tal-limitu).
6 Kontroll tal-kwalità (Kontroll proċedurali huwa inkluż fit-test) Kontroll negattiv: L-ebda kurva ovvja ta 'amplifikazzjoni għal kanali ta' skoperta FAM, HEX, CY5 n
Kontroll pożittiv COV: kurva ta 'amplifikazzjoni ovvja ta' kanali ta 'skoperta FAM u HEX, value≤32 Ct, iżda l-ebda kurva ta' amplifikazzjoni tal-kanal CY5;
Ir-rekwiżiti ta 'hawn fuq għandhom jintlaħqu simultanjament fl-istess esperiment;inkella, l-esperiment huwa invalidu u jeħtieġ li jiġi ripetut.
7 Determinazzjoni tar-riżultati.
7.1 Jekk ma jkunx hemm kurva ta 'amplifikazzjoni jew valur Ct> 40 fil-kanali FAM u HEX tal-kampjun tat-test, u hemm kurva ta' amplifikazzjoni fil-kanal CY5, jista 'jiġi ġġudikat li m'hemm l-ebda koronavirus ġdid 2019 (2019-nCoV) RNA fil-kampjun;
.2 Jekk il-kampjun tat-test ikollu kurvi ta 'amplifikazzjoni ovvji fil-kanali FAM u HEX, u l-valur Ct huwa ≤40, jista' jiġi ġġudikat li l-kampjun huwa pożittiv għall-koronavirus il-ġdid tal-2019 (2019-nCoV).
7.3 Jekk il-kampjun tat-test ikollu kurva ta 'amplifikazzjoni ċara biss f'kanal wieħed ta' FAM jew HEX, u l-valur Ct huwa ≤40, u m'hemm l-ebda kurva ta 'amplifikazzjoni fil-kanal l-ieħor, ir-riżultati jeħtieġ li jerġgħu jiġu ttestjati.Jekk ir-riżultati tat-test mill-ġdid huma konsistenti, il-kampjun jista 'jiġi ġġudikat bħala pożittiv għall-ġdid
koronavirus 2019 (2019-nCoV).Jekk ir-riżultat tat-test mill-ġdid ikun negattiv, jista’ jiġi ġġudikat li l-kampjun huwa negattiv għall-koronavirus il-ġdid tal-2019 (2019-nCoV).
Valur ta' ġudizzju pożittiv
Il-metodu tal-kurva ROC jintuża biex jiddetermina l-valur CT ta 'referenza tal-kit u l-valur ta' referenza tal-kontroll intern huma 40.
Interpretazzjoni tar-riżultati tat-test
1.Kull esperiment għandu jiġi ttestjat għal kontrolli negattivi u pożittivi.Ir-riżultati tat-test jistgħu jiġu determinati biss meta l-kontrolli jissodisfaw ir-rekwiżiti tal-kontroll tal-kwalità
2.Meta l-kanali ta 'skoperta FAM u HEX huma pożittivi, ir-riżultat mill-kanal CY5 (kanal ta' kontroll intern) jista 'jkun negattiv minħabba l-kompetizzjoni tas-sistema.
3.Meta r-riżultat tal-kontroll intern ikun negattiv, jekk il-kanali ta 'skoperta FAM u HEX tat-tubu tat-test huma wkoll negattivi, , ifisser li s-sistema hija diżattivata jew l-operazzjoni hija ħażina, t-test huwa invalidu.Għalhekk, il-kampjuni jeħtieġ li jerġgħu jiġu ttestjati.
